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腫瘤壞死因子elisa試劑盒操作步驟

更新時間：2017-05-19      瀏覽次數(shù)：1964
腫瘤壞死因子elisa試劑盒操作步驟如下：
 
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
 
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
 
3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)；空白對照孔不加。
 
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
 
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
 
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
 
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
 
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
 
9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min。
 
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
 
11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
 
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
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