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發(fā)福利啦!Western blot實(shí)驗(yàn)中不同樣本的不同處理方法大全

更新時(shí)間:2018-11-06      瀏覽次數(shù):1981

發(fā)福利啦!Western blot實(shí)驗(yàn)中不同樣本的不同處理方法大全

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樣品處理及保存


1、懸浮細(xì)胞樣品:把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。


2、貼壁細(xì)胞樣品
2.1 胰酶消化:用胰酶將細(xì)胞消化后,含血清的培養(yǎng)基中和胰酶,吹打,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。
2.2 細(xì)胞刮子收集細(xì)胞:對(duì)于某些蛋白(即對(duì)胰酶比較敏感或者實(shí)驗(yàn)特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進(jìn)行WB檢測(cè)),直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞,連同培養(yǎng)基收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。


3、動(dòng)物組織樣品:取下合適的動(dòng)物或者人的組織樣品后用預(yù)冷的PBS或者生理鹽水漂洗,盡量除盡殘留血液,用濾紙把多余PBS吸取干凈。把組織分成約50mg大小(依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰M(jìn)行調(diào)整),用錫紙分別包裝好或者用凍存管裝好,于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。


4、植物樣品:取得待測(cè)植物樣品后,用蒸餾水把泥土漂洗干凈,用濾紙把多余水分吸取干凈,分裝成合適大小于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。


5、細(xì)菌樣品:細(xì)菌培養(yǎng)完成后,10000rpm離心5min收集細(xì)菌,加入PBS吹打,10000rpm離心5min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。


6、若要檢測(cè)磷酸化蛋白,請(qǐng)?jiān)?個(gè)月內(nèi)進(jìn)行。長(zhǎng)時(shí)間保存樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測(cè)不到磷酸化條帶。


7、提取胞漿、胞核蛋白的樣品應(yīng)盡量采用新鮮樣品,因?yàn)閮龃鏁?huì)使細(xì)胞漿、細(xì)胞核破裂。
8、血液樣品(血漿中蛋白):3000rpm離心20min后收集上清,分裝后于-80度或者液氮凍存待用。3個(gè)月以內(nèi)檢測(cè)。


9、運(yùn)輸時(shí)間較長(zhǎng)或長(zhǎng)距離運(yùn)送樣品時(shí)采用干冰或者液氮。

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