ELISA檢測(cè)試劑盒原理我知道的全在這了

更新時(shí)間：2020-07-09

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　　一：ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)有必要恪守以下中心原理：

　　1、抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性；

　　2、抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；

　　3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可依據(jù)參加底物的色彩反響來(lái)斷定是否有免疫反響的存在，并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，ELISA檢測(cè)試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

　　4、試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。

　　5、用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

　　二：ELISA檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng)：

　　1、嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

　　2、洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

　　3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

　　4、底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

　　5、避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

　　6、在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

　　7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

　　8、任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

　　小編總結(jié)：檢測(cè)試劑盒有必要恪守以下中心原理，看完本文您就應(yīng)該有了基本的認(rèn)識(shí)和了解相信大家都明白了吧！總的來(lái)說(shuō)，希望對(duì)大家有所幫助。

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