國產(chǎn)ELISA試劑盒檢測細胞因子的優(yōu)缺點

更新時間：2013-05-29

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從21世紀(jì)初期，由于免疫學(xué)研究中一個非?；钴S的領(lǐng)域就是細胞因子的研究，它的檢測成為現(xiàn)代生物科學(xué)研究的重要方面。國內(nèi)的生物廠家，運用抗原、抗體反應(yīng)的原理已研制出了高靈敏度（sensitive）、高特異性、高度配套的細胞因子檢測試劑盒，生物試劑的檢測試劑盒涵蓋幾乎所有的細胞因子。依據(jù)檢測方法不同，可分為ELISA測定（酶聯(lián)免疫）和放射免疫測定。

1. 放射免疫測定

放射免疫測定是將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，方法大多采用競爭法原理。待檢的細胞因子與放射性同位素標(biāo)記的細胞因子競爭與細胞因子抗體（多克隆抗體或單克隆抗體）結(jié)合，再通過分離劑分離結(jié)合狀態(tài)的標(biāo)記物，計數(shù)后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算出細胞因子的量。本法具有靈敏度高（可檢測出ng甚至pg水平），特異性強、準(zhǔn)確性好等特點。

2.ELISA測定

2-1.酶聯(lián)免疫斑點（ELISPOT）檢測試劑盒是基于定量夾心ELISA法原理，將刺激后的細胞滴加到包被在貼PVDF微孔中，放置于37℃孵育。在孵育的過程中，細胞分泌的細胞因子即會被包被的抗體所捕獲，以下的過程與一般的ELISA實驗相同，zui后用不溶性的酶聯(lián)底物進行顯色，每一個顯色點（斑點）既代表一個分泌細胞因子的細胞。通過的ELISPOT分析儀或在顯微鏡下進行計數(shù)，就可以進行分析。ELISPOT法用于檢測單個細胞分泌的細胞因子，綜合了普通ELISA方法的高特異性和準(zhǔn)確定量的優(yōu)點，而且具有生物活性分析得出與功能相關(guān)的結(jié)果的優(yōu)點。

2-2.雙抗夾心ELISA法雙抗體夾心法需制備針對細胞因子不同位點的兩個單克隆抗體，一個抗體作為固相抗體用于包被，另一個作為標(biāo)記抗體?？刹捎贸Ｒ?guī)雙抗夾心法，也可采用一步法。由于血清中細胞因子的含量很低。常規(guī)ELISA法不能滿足要求，需引入生物素－親合素系統(tǒng)來提高靈敏度，即加入樣品后加入生物素標(biāo)記的另一個抗體，再加入親合素及生物素化的酶，再加入底物進行顯色，顏色與待檢的細胞因子量呈正比

三、試劑盒檢測細胞因子的優(yōu)缺點

A. 優(yōu)點

1.特異性強，這是標(biāo)記免疫技術(shù)的共同特點。

2.使用簡便，省時。

3.重復(fù)性好，影響因素少，實驗結(jié)果穩(wěn)定。

B. 缺點

1.測定的是蛋白的含量而不是生物學(xué)活性。

2.檢測的靈敏度不如生物學(xué)活性法。

3.由于各個實驗室制備的抗體不同，同一樣品用不同ELISA試劑盒檢測的結(jié)果也不一樣，實驗室之間難以進行質(zhì)量控制

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