RT-PCR檢測服務，實時熒光定量PCR檢測服務

上海信帆生物專業(yè)代做RT-PCR實驗，熒光定量PCR技術(shù)是普通PCR技術(shù)的改良和發(fā)展，它提高了普通PCR技術(shù)的特異性和準確性，能做到實時監(jiān)控和準確定量，廣泛應用于基礎(chǔ)研究、研究檢驗、海關(guān)商貿(mào)檢疫等各個領(lǐng)域。

1.技術(shù)優(yōu)勢：

*靈敏度高，可以檢測低拷貝的目的基因

*高精度，PCR擴增階段包括3個階段：指數(shù)增長期，線性增長期和平臺期，96個重復指數(shù)增長期表現(xiàn)出高精度，而平臺期則變化差異較大

*定量能力強，簡單的流程就能得到高質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)

*動力學范圍寬，可以定量9個數(shù)量級的差異，速度快，節(jié)省時間和勞力，不需要電泳檢測
*安全，使用熒光染料發(fā)光，不用EB或放射性物質(zhì)，極大降低對實驗人員健康的威脅
*重復性好

2.檢測方法

 (1) SYBR Green Ⅰ

   游離狀態(tài)下的SYBR Green分子發(fā)出微弱的熒光信號，當與dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合時，則發(fā)出綠色熒光，可在520nm波長下檢測熒光信號，熒光信號的強度與dsDNA數(shù)量呈正相關(guān)。

SYBR Green Ⅰ染料法的特點：

   高靈敏度，低背景信號，操作簡單，不影響酶促反應，價格便宜。

(2)探針法：TaqMan熒光探針，MGB探針

  TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團連接在探針的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等熒光基團，而淬滅劑則在3`末端，一般為TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA發(fā)出黃色熒光，BHQ1和BHQ2不發(fā)出熒光。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

  TaqMan-MGB探針與普通TaqMan熒光探針相比具有更短的序列和更高的序列特異性，常被用于SNP分型的研究中，有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。

  RT-PCR檢測服務，實時熒光定量PCR檢測服務

探針法的特點：

  與染料法相比具有更低的背景信號，更高的靈敏度，可以檢測低于10個分子的模板，更高的特異性，結(jié)果也更準確。同時也具有染料法的操作簡單，不影響酶促反應等優(yōu)點。

3.檢測周期
常規(guī)檢測任務2－3周內(nèi)完成，具體時間根據(jù)要檢測的基因和樣本數(shù)而定

4.報告內(nèi)容

提供電泳圖片，引物調(diào)試與樣本擴增相關(guān)圖片（擴增曲線/溶解曲線/標準曲線），定量PCR導出的原始數(shù)據(jù)，結(jié)果的初步匯總分析以及實驗報告；

5.送樣要求

1、組織樣本在取樣后，迅速放入Trizol或RNA保存液中；

2、細胞請用培養(yǎng)基,Trizol或RNA保存液；

3、RNA保存液保存的樣本可冰袋運輸；其它保存條件請干冰運輸。

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